ELISA試劑盒中抗原與抗體的影響因素

抗原是能在機體中引起特異性免疫應答的物質。小分子化合物在與大分子蛋白質結合后能引起機體產生特異性抗體的，稱為半抗原（hapten）。抗原進入機體后，可刺激機體產生抗體和引起細胞免疫。例如某些激素、藥物等。能在機體中引起抗體產生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質。ELISA是一種免疫測定。一個抗原分子可帶有不同的決定簇。在免疫測定中，抗原是指能與抗體結合的物質。在臨床檢修中主要通過抗原抗體反應檢測體液中的抗體或抗原性物質。抗原的反應性取決于抗原決定簇（antigenic determinant），或稱為表位（epitope）。免疫測定（immunoassay，IA）是應用免疫學技術測定標本的方法。
IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig的輕鏈是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE.與免疫測定有關的Ig主要為IgG和IgM.Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。五類Ig的重鏈結構不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG的結構見圖。
IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區段，其中兩個相同的區段稱抗原結合片斷（Fab）。兩者構成抗體的抗原結合部位，只與相應的抗原決定簇匹配，發生特異性結合，是抗體專一性結合抗原的結構基礎。每個Fab都保留結合抗原的能力，但只有一個抗原結合位點，是單價的，與抗原結合后不泛起凝集或沉淀。另一區段稱Fc段，無抗體活性，但具有IgG*的抗原性。重鏈和輕鏈的N真個氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區，分別用VH和VL表示。
如將多種抗原或含有多個抗原決定簇的抗原注入機體，則將由多系的B細胞產生相應的多種抗體，這些抗體均存在于免疫血清中。含有抗體的血清稱為抗血清。免疫測定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。將免疫的脾細胞（含產生抗體的B細胞）與小鼠腫瘤細胞融合，分離雜交瘤細胞，接種于小鼠腹腔，產生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。每一系B細胞只產生針對某一抗原決定簇的抗體。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。產生抗體的B細胞可在體外與繁殖力強的腫瘤細胞融合成雜交瘤細胞。將單個雜交瘤細胞分離，在體內或體外培養而分泌的抗體單克隆抗體。單克隆抗體僅針對一種抗原決定簇，具有很高的特異性。