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      魚elisa檢測試劑盒在使用的時候需注意些什么呢?

      發(fā)布時間:2021-07-21   點擊次數:1742次
        魚elisa檢測試劑盒測定技術的發(fā)展:臨床測定技術的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前,分子生物學正在并最終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。那么魚elisa檢測試劑盒在使用的時候需注意些什么呢?下面一起來了解一下吧!
       
        魚elisa檢測試劑盒的注意事項如下:
        1、正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
        
        2、在elisa中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
        a、固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
        b、包被抗體的選擇:將抗體吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
        c、酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法”在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
        d、酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
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